【產品簡介】
骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建。現(xiàn)已證實，在骨中存在一些特殊物質，能夠影響到破骨細胞的活性。每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中，由骨切片上產生凹點證明破骨能力。隨后用培養(yǎng)基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。只有當兩項測試都呈陽性時，該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。破骨細胞產生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統(tǒng)的對凹點染色方法，亦可使用培養(yǎng)基酶免吸附檢測法Crosslaps，兩者關系見圖1與2。由于破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質，而從牛骨切片中提取的蛋白質用于96孔板，IDS公司開發(fā)了能夠*適用于6，12，24，48孔板的骨皮質切片。如圖3所示。將人破骨細胞分散覆蓋于牛骨皮質片上，然后加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM）。第6天取等量細胞培養(yǎng)上清液用于檢測膠原c端交聯(lián)肽（ctx）的量（培養(yǎng)基ELISA-CrossLaps）,從骨片上轉移破骨細胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點（圖1）。

用這種6孔板大骨片（GBS）來提取破骨細胞蛋白，這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養(yǎng)，對蛋白質的表達是有影響的（數(shù)據(jù)未列出）。要進行破骨細胞的基因描述實驗時，我們推薦使用這些底物提取RNA。從骨切片分離RNA的方案和人破骨細胞的培養(yǎng)方案可根據(jù)要求制定.

【來源】
骨切片由牛股骨的皮質部分制成，*適合96孔板，直徑6mm，大概200μm厚。
【儲存】
骨切片保存于4°C下70%乙醇中。為了保持骨切片的質量，應縮短使用周期和避免室溫下放置。
【處理】
推薦在轉移至96孔板之前，先將骨切片置于含培養(yǎng)基的10%血清中清洗三次。
【培養(yǎng)】
重吸收實驗一般持續(xù)72小時（見圖2）。然而在加入試劑到破骨細胞培養(yǎng)液中16或24小時后，就可觀察到細微的變化了，甚至8小時后即可用相應方法觀察到。
【特征】
與凹點染色和劃線不同，培養(yǎng)基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細胞培養(yǎng)的終止。因此，可以從相同的股切片中獲得幾個樣品，從而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為可能。材料的處置與常見細胞培養(yǎng)物的處置相同。
【訂購信息】

【參考文獻】

1. HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL 164:1537-1545 (2004).
2. HOLLBERG ET AL. EXP CELL RES 279:227-238 (2002).
3. IVASKA ET AL. J BIOL CHEM 30;279(18):18361-9 (2004).
4. KARSDAL ET AL. AM J PATHOL 166:467-476 (2005).
5. SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)
6. STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).