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熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測(cè)量單細(xì)胞中比率鈣中國(guó)醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志1999年第3期第16卷實(shí)驗(yàn)研究作者：馬曉冬朱曉亮趙清張瑾張颯雷國(guó)華黃行許鮑永耀單位：馬曉冬趙清張瑾張颯雷國(guó)華黃行許鮑永耀（*軍醫(yī)大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室）；朱曉亮（南方醫(yī)院皮膚科,廣東廣州510515）關(guān)鍵詞：激光掃描共聚焦顯微鏡；Fluo-3/AM；FuraRed；比率鈣...摘要：應(yīng)用ACAS570激光掃描共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM簡(jiǎn)稱共焦顯微...

激光掃描共焦顯微鏡（LSCM）是八十年代問(wèn)世的一種新型分析儀器，由于其高分辨率，高靈敏度，高放大率等特點(diǎn)，在細(xì)胞水平上能作多種功能測(cè)量和分析，成為分析細(xì)胞學(xué)的重要研究工具，激光掃描共焦顯微鏡是在顯微鏡基礎(chǔ)上配置激光光源，掃描裝置，共軛聚焦裝置和檢測(cè)系統(tǒng)而形成的新型顯微鏡。它對(duì)活細(xì)胞分層掃描后得到光學(xué)切片，可進(jìn)行細(xì)胞三維重建。測(cè)量分析細(xì)胞形態(tài)學(xué)參數(shù)和熒光強(qiáng)度。利用熒光探針標(biāo)記LSCM可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)和離子的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行定性、定量、定時(shí)和定位分析。LSCM可以進(jìn)行顯微手術(shù)，細(xì)...

摘要：目的建立流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作為鈣指示劑，在有或無(wú)細(xì)胞外鈣\[Ca2+\]o存在的條件下，測(cè)定靜息和凝血酶激活狀態(tài)下人血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的變化。結(jié)果Fluo3AM標(biāo)記的血小板的平均熒光強(qiáng)度明顯增加。凝血酶使負(fù)載Fluo3AM標(biāo)記的血小板胞漿\[Ca2+\]i明顯增加，且顯示劑量依賴和對(duì)\[Ca2+\]o的依賴。結(jié)論凝血酶引起血小板胞漿\[Ca2+\]i增加的來(lái)源主要是\[Ca2...

培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始，各種目的無(wú)血清培養(yǎng)AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一...

（一）直接免疫熒光標(biāo)記法取一定量細(xì)胞（約1X106細(xì)胞／ml），在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上（）,再直接加入連接有熒光素的抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記反應(yīng)（如做雙標(biāo)或多標(biāo)染色，可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時(shí)加入），。孵育20-60分鐘后，用PBS（pH7．2—7．4）洗1-2次，加入緩沖液重懸，上機(jī)檢測(cè)。本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，易于分析，適用于同一細(xì)胞群多參數(shù)同時(shí)測(cè)定。雖然直標(biāo)抗體試劑成本較高，但減少了間接標(biāo)記法中較強(qiáng)的非特異熒光的干擾，因...

ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2.手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（特別是...

的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELSIA，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說(shuō)明，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。4.1標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)...

一、原理（一）什么是熒光，簡(jiǎn)單地講，當(dāng)用一定波長(zhǎng)的光（如紫外光）照射某種物質(zhì)時(shí)，經(jīng)過(guò)照射的物質(zhì)在極短時(shí)間內(nèi)即可發(fā)射出一種可見(jiàn)的光，這種光即為熒光。在生物中，由于產(chǎn)生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：1．自發(fā)熒光：在生物的某些組織中，經(jīng)紫外線照射后能直接發(fā)射出熒光的稱為自發(fā)熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經(jīng)紫外線照射后，即可發(fā)出紅色熒光。2．次生熒光：有些生物組織經(jīng)紫外線照射后，并不能發(fā)出熒光，但是當(dāng)它吸收熒光染料后也可以產(chǎn)生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光...

1．固定：用4%的多聚甲醛固定液。對(duì)于冰凍切片，甲醛固定有時(shí)比冰凍丙酮好；但對(duì)于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時(shí)候商品化的抗體會(huì)有比較適合而推薦的固定液，請(qǐng)于購(gòu)置前注意說(shuō)明書。BouinS固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對(duì)組織的穿透力較強(qiáng)，固定較好，結(jié)構(gòu)完整，但因偏酸，對(duì)抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標(biāo)本的長(zhǎng)期保存。PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對(duì)超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存...

臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的標(biāo)本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。（一）臨床標(biāo)本的收集A、血液標(biāo)本有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無(wú)法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無(wú)凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他...

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除...

動(dòng)物樣品的采集及處理方法遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在野生動(dòng)物和圈養(yǎng)動(dòng)物的保護(hù)和管理中變得日益重要。在本文中，我們總結(jié)了一些能簡(jiǎn)便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法。我們?cè)诓杉瘶悠分埃瑢?duì)將要進(jìn)行的遺傳學(xué)分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，當(dāng)采集地與實(shí)驗(yàn)室有相當(dāng)距離時(shí)，采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地，這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗(yàn)。首先，所有樣品均應(yīng)以個(gè)體序號(hào)進(jìn)行標(biāo)注，并且應(yīng)寫上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期，越詳盡越好，以便同一個(gè)體的不同類數(shù)據(jù)可以相互引用，另外，地理來(lái)...